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原位雜交中探針的選擇

時(shí)間:2021-07-23 16:39:28 來源:[db:來源] 點(diǎn)擊:360次

鼓風(fēng)干燥箱DNA探針、RNA探針和寡核苷酸探針均能通過不同的酶促分子反應(yīng)進(jìn)行標(biāo)記。寡核苷酸探針的長(zhǎng)度較短,因此避免了探針內(nèi)部退火的問題,在雜交時(shí)的滲透能力也更好,探針與靶標(biāo)的接觸這是影響原位雜交是否成功的重要因素之一。DNA探針、RNA探針在合成時(shí)需要控制探針片段長(zhǎng)度,通常300-1000bp左右,能覆蓋到較長(zhǎng)片段的靶核酸序列,增加檢測(cè)的靈敏度。
就DNA探針和RNA探針的比較,DNA探針在雜交過程中會(huì)出現(xiàn)探針雙鏈之間退火的可能,也更傾向于在溶液中形成大分子的探針聚合體,從而影響其滲透能力。而RNA 探針的應(yīng)用,將提高DNA-RNA雜交子的熱穩(wěn)定性。
Tips:RNA探針因其單鏈、高分子結(jié)合力、可適應(yīng)高溫雜交的特性,其檢測(cè)特異性和靈敏度均優(yōu)于DNA探針。常用的RNA探針標(biāo)記方法為構(gòu)建質(zhì)粒后進(jìn)行轉(zhuǎn)率合成。通過PCR擴(kuò)增的方法,可以更方便地進(jìn)行RNA探針的制備;RNA探針合成后,還需驗(yàn)證其對(duì)目標(biāo)片段檢測(cè)的靈敏度和特異性。

 

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